Evaluation de la tolérance du tournesol à Phoma Macdonaldii au stade 1ère paire de feuille

Avant semis: désinfection des graines 5 min. dans de l'hypochlorite de Na à 6° Chl., rinçage 3 fois à l'eau distillée stérile. Semis de trente graines  à 2 cm de profondeur dans du terreau. Arrosage des plantes à l'eau. Après 10 à 12 jours de culture en serre: transfert éventuel des  plantes en phytotron: 24°C jour/ 17°C nuit, humidité relative: 75-85% et héméropériode: 14h. Acclimatation des plantes pendant 3 jours.

Préparation d'une solution d'eau distillée: 0.5% de jus d'orange non traitée et 0.25% de gélatine. Après strérilisation, dépôt d'environ 3 ml de cette solution  à la surface d'une culture de Phoma macdonaldii âgée de 10 jours. Obtention, par agitation mécanique, d'une  suspension de pycniospores  ajustée à la concentration finale de 10⁶ pycniospores par ml.

Inoculation  réalisée sur des plantes au stade 1ère paire de feuilles. Dépôt d'une goutte de 20 µl de la suspension de pycniospores  à l'insertion du pétiole du cotylédon sur la tige. Pour une plante, les deux cotylédons sont ainsi inoculés. Les plantes sont ensuite placées en atmosphère saturée en humidité pendant 48 heures.

L'évolution de la maladie est notée 7 jours après contamination en utilisant une échelle (de 0 à 9) mise au point au laboratoire. Cette échelle est basée sur la surface du pétiole de cotylédon nécrosé: